一,實(shí)驗目(mù)的(dí):
新(xīn)疆天(tiān)康生物股份(fèn)有限公(gōng)司選用小(xiǎo)美超(chāo)聲的非(fēi)接(jiē)觸(chù)式DNA打斷(duàn)儀來對樣品支原體細(xì)菌處理(lǐ)後提(tí)取(qǔ)樣(yàng)品(pǐn)中(zhōng)的(dí)蛋白(bái),提取的蛋(dàn)白濃度越(yuè)高越(yuè)方(fāng)便她們下一步(bù)的(dí)實(shí)驗。
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二(èr),產(chǎn)品特點:
1.處理量(liáng)大,一次可以(yǐ)處理11個2ml的樣品或(huò)者22個0.65ml的樣品(pǐn)
2.沒有(yǒu)專用(yòng)耗(hào)材,實驗(yàn)室(shì)中常用的(dí)離心(xīn)管即(jí)可;
3.采(cǎi)用4℃低(dī)溫(wēn)水(shuǐ)浴超(chāo)聲波(bō),能量(liáng)分(fēn)布均(jūn)匀,樣(yàng)品在低溫(wēn)環境(jìng)下進行破碎,防止變性。
4.儀(yí)器采用非接觸式進行超聲(shēng)破碎,避免樣品間的(dí)交叉(chā)汙染(rǎn)
5.提(tí)取蛋白(bái)濃度相比傳統(tǒng)探頭時超聲(shēng)波(bō)細胞破碎(suì)儀濃度更高,效(xiào)率更高。
三,裝機準(zhǔn)備(bèi)
1,打(dǎ)開(kāi)外(wài)包(bāo)裝(zhuāng),將非接(jiē)觸(chù)式DNA打斷儀設備的(dí)所有配件(jiàn)取(qǔ)出(chū),等待(dài)使用
2,將冷水機(jī)進(jìn)水並將進出水口水管與儀(yí)器(qì)主機(jī)進(jìn)出水(shuǐ)口連(lián)接(jiē);
2,通電(diàn),先(xiān)將(jiāng)電源綫(xiàn)接到確保(bǎo)有點的插(chā)座(zuò),試試(shì)儀器(qì)是否通(tōng)電。
3,儀(yí)器(qì)外包裝(zhuāng)及(jí)說明(míng)書(shū)和(hé)各種零配(pèi)件,拆開(kāi)後保(bǎo)存收(shōu)好;
四(sì),實驗準(zhǔn)備:
1,提(tí)前培養好(hǎo)的菌液
2,或將菌液從(cóng)冰(bīng)箱(xiāng)中(zhōng)取出(chū),化凍(dòng);或者放(fàng)入恒(héng)溫(wēn)水浴鍋中40℃以下進(jìn)行解(jiě)凍處理
3,2ml離心管一包
五,實驗步驟:
1,將(jiāng)提(tí)前準(zhǔn)備的菌液(yè)分別加(jiā)入(rù)到8個(gè)2ml離心管(guǎn)中,分(fēn)別向離心管(guǎn)中加入500ul,250ul,125ul,62.5ul;(每(měi)兩個(gè)離心管為一組加(jiā)入相(xiāng)同體(tǐ)積的(dí)樣品),設置儀器功率(shuài)百分之(zhī)100,超(chāo)聲時間30min,取(qǔ)出樣品進(jìn)行蛋(dàn)白定(dìng)量實驗(yàn),實(shí)驗結(jié)果顯示(shì),樣(yàng)品(pǐn)體積(jī)在125ul時(shí)效果較好。
2,再將提(tí)前準備(bèi)好的樣(yàng)品(pǐn)菌液(yè)分(fēn)別加入到6個(gè)2ml離心管中,分別(bié)向離心(xīn)管中加入125ul,100ul,75ul;(每兩(liǎng)個離心(xīn)管為一(yī)組(zǔ)加(jiā)入相同(tóng)體積(jī)的(dí)樣(yàng)品),設(shè)置(zhì)儀器(qì)功(gōng)率百(bǎi)分之100,超聲(shēng)時間30min,取(qǔ)出樣品進行(háng)蛋白(bái)定(dìng)量(liáng)實驗,實(shí)驗結果顯(xiǎn)示(shì),樣品(pǐn)體積(jī)在100ul時效果較好(hǎo)。
3,前(qián)兩步實驗目(mù)的(dí)是通(tōng)過確定時(shí)間,不(bù)同體積(jī)的(dí)梯(tī)度(dù)實驗,得出(chū)樣品在100ul時(shí)破(pò)碎(suì)效果(guǒ)較好(hǎo),再準備10個(gè)2ml離心管通過確定體積,不同時(shí)間(jiān)的梯度實(shí)驗,再(zài)得(dé)出樣(yàng)品(pǐn)量(liáng)在100ul時破(pò)碎多久(jiǔ)效果較好。
4,分(fēn)別向10個2ml離心(xīn)管中各加入(rù)100ul提前準備好(hǎo)的(dí)菌液,放(fàng)入(rù)儀(yí)器適配器進(jìn)行超聲破碎,超聲功率百分之(zhī)100,分(fēn)別(bié)在樣品破碎(suì)25min,30min,35min,40min,45min時各取(qǔ)兩(liǎng)個(gè)樣品(pǐn),通過進行蛋白(bái)定量(liáng),實驗結(jié)果顯示,確(què)定樣品(pǐn)體積的情況(kuàng)下(100ul),40min時蛋白(bái)濃(nóng)度(dù)較高。
5,本次實驗(yàn)結果顯示,支(zhī)原(yuán)體細(xì)菌使用(yòng)非接觸(chù)DNA打斷(duàn)儀進行蛋(dàn)白提取(qǔ)時,樣品(pǐn)體積(jī)100ul,破(pò)碎40min,實(shí)驗(yàn)效(xiào)果蛋白(bái)定量(liáng)濃度為(wéi)406ug/ml。
六,儀(yí)器注(zhù)意事項
1.細胞破碎(suì)結束後(hòu)請(qǐng)關(guān)閉電源;
2.使(shǐ)用完(wán)成後,拿酒精(jīng)進行(háng)內腔(qiāng)的(dí)擦(cā)拭(shì)消毒
七,實(shí)驗(yàn)結果
實驗(yàn)一結果(guǒ):
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實驗(yàn)二結果(guǒ):
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實(shí)驗(yàn)三結(jié)果:
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